北京著名雀斑医院 http://m.39.net/baidianfeng/a_8622619.html上海中医药大学附医院
背景：交感神经系统可影响心输出量和外周血管阻力调节血压。交感神经活动增加会引起多动循环和外周血管收缩，导致高血压的产生。高血压经常与交感神经过度活动有关，这对靶器官有有害影响，也是心血管并发症的预测因素。此外，自主神经系统异常可以诱发，例如心动过速和肥胖，也是心血管疾病的危险因素。高血压是由于交感神经和副交感神经心血管调节紊乱；交感神经活动增加或迷走神经心脏张力降低导致高血压。因此，降低交感神经活动或增加副交感神经活动可作为控制高血压的靶点。肾上腺素作为一种神经递质，可以增强高血压的产生。肾上腺素可由与去甲肾上腺素相关的交感神经末梢释放。肾交感神经与交感神经系统和长期动脉压的控制有关。肾上腺素能活动的慢性增加可引起动脉压的增加，而这种活动的慢性减少可引起动脉压的降低。一项研究报告，肾上腺髓质是由交感和副交感神经传入和传入决定的。去甲肾上腺素是一种有效的血管收缩激素，而肾上腺素则不太有效。交感神经末梢使肾上腺分泌去甲肾上腺素和肾上腺素进入血流。肾上腺的其他神经递质，如γ-氨基丁酸(GABA)和血清素也有助于调节BP，通过儿茶酚胺分泌肾上腺嗜铬细胞。一项研究表明，与对照组相比，BP高的年轻人血清皮质醇水平较高。显然，交感神经活动和肾上腺，包括皮质和髓质，与高血压密切相关。耳廓海螺由迷走神经的耳支支配。针刺锥穴可通过迷走神经诱导传入投射到孤束核(NTS)。神经突触中的神经元参与自主反射和自主功能的调节。耳廓心穴(CO15)位于海螺，而CO15和耳廓神门穴(TEF3)已被用于治疗高血压。台湾的学者研究发现，2Hz电针(EA)在双侧足三里(ST36)和上巨(ST37)增加心率变异性(HRV)的高频成分，而50HzEA增加HRV的低频成分，因此，提示2HzEA可以增加迷走神经活动，而50Hz增加交感神经活动。一项研究发现2HzEA显著抑制心血管按压反射，但40Hz或Hz不能在相同的点刺激[15].因此，该研究人员研究EA在CO15和TEF3点使用2HzEA降低SHR中BP的效果和机制。并将结果发表在年12月的杂志上。方法：2.1.动物。雄性SHR5至7周是从BioLASCO台湾有限公司购买的。大鼠在中国医科大学动物中心(CMU)饲养，光照/黑暗周期为12h。室温和湿度由空调控制在20-24°和湿度50%-70%。这些老鼠是自由喂养的，并提供了足够的饮用水。动物使用得到了CMU机构动物护理和使用委员会的批准，并遵循了《实验动物使用指南》（国家科学院出版社)中的建议）。2.2.实验程序。SHR开始于9周龄，SBP大于毫米汞柱，DBP大于90毫米汞柱。因此，实验是在10周龄开始到12周龄。2.3.实验一：探讨耳针疗法对SHR患者心率、血压的影响2.3.1.分组共将18个SHR随机分为3组(n6/组)：（1）对照组(CG)，大鼠不接受耳廓EA治疗；（2）假手术组(SG)，将2HzEA应用于耳廓螺旋1(Hx1)和螺旋2(Hx2)点；（3）治疗组(TG)，其操作与SG相同，但对CO15和TEF3点采用2HzEA。2.4.SHR中HR和BP的测量。用尾凝器(LE，PanlabHarvard)在2%异氟醚气体麻醉下测定大鼠尾部HR和BP)。在耳廓EA治疗前后进行HR和BP的测量，时间为上午8：00。中午12：00。在测量之前，大鼠保持在28°用热垫加热10min，可检测尾部动脉搏动。本研究中BP和HR的值是三个测量值的平均值。2.5.针灸治疗不锈钢针灸针(在CO15和TEF3(TG)或Hx1和Hx2(SG)点中插入32G，Quian-Hui，新台北市，台湾；直径0.27毫米，长度13毫米。TEF3位于三角窝的顶端，位于上下两腿之间。Hx1位于螺旋上，低于螺旋结节，Hx2低于Hx1。同侧CO15和TEF3是一对，Hx1和Hx2也是一对。这两对都连接到一个电刺激装置(Trio，日本)。刺激的频率为2Hz。刺激强度为轻微可见抽动，治疗持续时间为20min。SHR接受治疗3次/周，持续3周，即10、11和12周。大鼠在5%异氟醚深度麻醉下，在最终治疗完成后4h处死。采集大鼠心脏、脑组织和肾上腺的血液。2.6.肾上腺切除术大鼠在2%异氟醚气体下麻醉。从椎柱侧2厘米到第一至第三腰椎的背侧切口，并解剖和拔出背肌，直到肾上腺暴露。切除双侧肾上腺及其周围脂肪组织。2.7.实验2：证实耳电针降低BP引起的肾上腺GlandinSHR。10周龄大鼠，18例雄性SHR随机分为3组6组：正常组(NG)，不施加耳廓EA；EA组(EG)，大鼠在CO15和TEF3点接受2HzEA；双斜线组。在CO15和TEF3点，大鼠接受2HzEA，并在EA处理前30min将双三氯环线(GABA-A拮抗剂；1mg/kg溶于10%二甲基亚砜(DMSO)99.5%+10%吐温20+80%蒸馏水或去离子水-DDW)缓慢注入尾部。耳穴EA治疗连续3周，即10周、11周和12周。在第三、第六和第九次治疗前后测量HR和BP。大鼠在5%异氟醚气体麻醉下，在最后治疗后15min处死。2.8.液相色谱-电喷雾电离-质谱分析。分析前，将50μL血清或肾上腺水提取物与μL甲醇通过剧烈旋涡完全混合。样品在00rpm离心10min，收集μL上清液在35下干燥°在真空浓缩器中放置2h。将干燥的样品溶解在50μL超纯水中，通过监测m/z转变到和测量多巴胺和皮质醇水平使用XevoTQ-XS(Waters)通过ES+MRM模式分别达到.2到.06)。其他神经递质用VIONIMSQ-Tof在丹斯酰化过程后测定。液相色谱-电喷雾电离质谱(LC-EM-MS)分析如前所述检测肾上腺和血清中儿茶酚胺和神经递质的强度。对于代谢物丹西化，在50mMNaHCO3，pH9.5中加入20μL20mg/mL丹西氯化物溶解样品。混合物在70°时孵育2h，然后加入80μL的超纯水，混合液于70°温育持续30分钟。在00转/分钟离心10分钟后，将反应混合物的上清液转移到插入瓶中。流量设定为0.2mL/min，柱温为35°C.分离是用反相LC在BEHC18柱(2.1mm，Walters)上进行的，样品注入量为7.5μL。从99%流动相A（超纯水+0.1%甲酸）和99%流动相B（%甲醇+0.1%甲酸）开始洗脱，在1%B处保持0.5min，在5.5min时提高到90%B，在90%B处保持1min，然后降低到1%B，保持1min。通过抽1%B使柱平衡4min。采用ESI+模式获得LC-ESI-MS色谱图，其方法如下：2.5kv毛细管电压，°C源温度，脱溶温度°保持锥形气体在10L/h，脱溶气体在L/h，并由MS收购e模式从去0m/z还有a0.5s扫描时间到了。数据经分析过使用UNIFI软件(Waters)有一个图示的色谱图，并总结在一个集成的信号区域。结果是已提出作为a比率比较一下与控制老鼠。2.9.数据准备和统计分析。所有数据采用SPSS软件对数据进行分析。显著差异进行分析。采用单向方差分析，然后采用Tukey检验（后自组织），然后进行混合模型分析，观察耳针EA和假EA在纵向治疗中对HR和BP的变化有何影响。统计学意义在p0.05时为有意义。结果：3.1耳电针HR和BPinSHRs的作用在CG、SG和TG（图）中，HR在基线(第一次耳EA治疗前)没有明显差异1(a))。在9次治疗中，SG和CG之间的HR没有显著差异，而TG中的HR低于第七次和第九次耳EA治疗前后的CG和SG(图1(a))。这些结果表明，在CO15和TEF3处理后的耳EA可以降低SHR的HR。在基线时，各组之间的SBP也没有显著差异(图1(b))。在第三和第四次治疗之前和第二、第三、第四和第八次治疗之后，SG中SBP低于CG(图1(b))，而在其他治疗时间，CG和SG之间没有显着性差异(图1(b))；在每一次耳EA治疗前后，TG中SBP低于CG和SG(图1(b))。在第一次或第二次、第四次或第五次治疗之前，SG和TG之间没有显着性差异(图1(b))已确定。DBP在基线时也没有差别(图1(c))。在第一、第四、第九和第四、第七和第八次治疗之前，SG中的DBP低于CG(图1(c))；否则，不存在显著差异(图1(c))。在每次治疗前后，TG中的DBP低于CG和SG(图1(c))，除了在第五次治疗之前，SG和TG之间没有显著差异(图1(c))。总之，在CO15和TEF3的耳EA可以立即降低SBP和DBP，而这些对Hx1的耳EA的影响Hx2很弱。在HR分析中，SG或TG中的治疗与治疗时间之间的相互作用不显著；然而，在BP(包括SBP和DBP分析)中，治疗与治疗时间之间的相互作用显著(表1).3.2.双曲线与耳EA对SHRHR和BP的影响在EG中第九次治疗前后，HR低于NG和BG(图2(a))。第三次和第六次治疗前后，NG、EG和BG的HR差异无显着性(图2(a))。在第三、第六和第九次治疗前后，EG中的SBP低于NG和BG(图2(b))，而SBP在第三、第六或第九耳电针治疗前后NG和BG之间没有显著差异(图2(b))。在第三、第六和第九次治疗前后，EG中的DBP低于NG和BG(图2(c))。在第三、第六或第九次治疗前后，NG和BG之间的SBP没有显著差异.第六次治疗前的例外情况，当BG中的DBP低于NG时(图2(c))。综上所述，结果表明，在降低HR和降低SBP和DBP方面，耳电针的有效性可以通过先前的双线注射来逆转。3.3.耳针刺对最终耳后4小时肾上腺皮质和血清神经递质的影响。在最后的耳廓EA治疗后4h，肾上腺的去甲肾上腺素，肾上腺素，多巴胺和可的松水平无明显差异在组中(图3(a))。虽然血清素水平在TG中高于CG(图3(a))，它们在CG和SG之间或SG和TG之间没有显著差异(图3(a))。肾上腺的GABA水平在TG中高于CG和CGSG，而CG和SG之间的水平没有显著差异(图3(a))在最终治疗后4小时。血清去甲肾上腺素、肾上腺素、5-羟色胺和GABA水平在各组间无显着性差异。治疗后4小时组(图3(b))。综上所述，结果表明，在CO15和TEF3的耳EA可以提高肾上腺的5-羟色胺和GABA水平，而在Hx1和Hx2的耳EA不能产生类似的效果。3.4.耳针刺对耳后15分钟肾上腺皮质和血清神经递质的影响。肾上腺的肾上腺素水平在BG中高于NG或EG(图4(a))。在NG和EG之间或EG和BG之间，水平没有显著差异(图4(a))。肾上腺的皮质醇水平在BG中高于NG(图4(a))，而它们在NG和EG之间或EG和BG之间没有显著差异(图4(a))。中去甲肾上腺素，多巴胺，5-羟色胺和GABA的水平肾上腺在各组之间没有显著差异(图4(a))在最终耳廓EA治疗后15分钟。血清去甲肾上腺素和肾上腺素水平在NG中高于EG和BG(图4(b))。它们在EG和BG中的水平没有显著差异(图4(b))。血清5-羟色胺水平在NG中高于EG(图4(b))，而它们在NG和EG之间或EG和BG之间没有显著差异(图4(b))。血清GABA水平在各组间无显着性差异(图4(b))。血清多巴胺水平也无显着性差异(图4(b))。综上所述，结果表明，在CO15和TEF3条件下，耳电刺激可降低治疗后15min血清去甲肾上腺素和肾上腺素水平，而双果皮预处理不能逆转这种降低。此外，双线预处理可降低血清5-羟色胺水平。讨论结果表明，与CG相比，TG治疗7次耳电刺激后HR降低。在SG中没有观察到这一点，提示耳EA在CO15和TEF3可以降低HR，但在Hx1和Hx2不能。此外，本研究的结果还表明，在HR分析中，治疗与治疗时间之间的相互作用不显著。在CO15时，EA可以通过迷走神经的耳支诱导信号到NTS。这些信号然后通过迷走神经传出途径从背运动核(DMN)和模糊核重传到心脏窦房结，以减少HR。这些信号也可能涉及中间神经元通过尾侧和吻侧腹外侧髓，然后通过脊髓内侧细胞柱来调节交感神经活动影响心脏窦房结，降低HR.总之，结果表明，在CO15和TEF3的耳EA可以增加迷走神经传导，调节交感神经活动，影响窦房结，减少HR。去甲肾上腺素和肾上腺素是肾上腺的主要儿茶酚胺；交感纤维从节前纤维，然后通过交感神经节延伸到肾上腺髓质外的嗜铬细胞，分泌肾上腺素和去甲肾上腺素，可增加HR和BP.虽然副交感神经对肾上腺的神经支配是一个持续的争论，但最近关于肾上腺迷走神经纤维的观察报告提示刺激迷走神经可以通过迷走神经传出连接改变肾上腺激素，这表明耳EA治疗对腺体的另一种途径。结果还表明，SBP仅在第三和第四次治疗前后和第二和第八次治疗后与CG相比在SG中较低。与CG相比，DBP仅在第四、第七和第八次治疗之前和第一、第四和第九次治疗之后才降低。除第五次治疗前外，TG中的SBP和DBP均低于CG和SG，而TG中的SBP和DBP在SG中相似。这些结果表明，在CO15和TEF时耳电刺激能降低血压，治疗与治疗时间之间的相互作用是显著的。此外，我们的结果表明，在TG中腹腔神经丛最终耳电刺激治疗后4h，肾上腺GABA水平升高。一些研究表明，迷走神经可以通过迷走神经传出连接改变肾上腺激素。神经系统与迷走神经背运动核之间的相互作用将迷走神经传入信号与传入信号联系起来。迷走神经传出纤维从迷走神经的DMN中也支配神经节，这可能是这些节后儿茶酚胺能纤维的起源。肾上腺也由含有节前交感纤维的腹腔神经节支配。一些研究报告说，口服或静脉注射GABA可以降低动物和人类的血压。口服GABA可显著降低SHRs中的SPB，而Wistar-Kyoto大鼠（正常致盲大鼠)则不显著）。摄入含有GABA的牛奶可降低轻度高血压患者的血压。GABA已在各种内分泌器官中被鉴定，它是由肾上腺皮质类固醇产生细胞合成和储存的。GABA以旁分泌方式通过GABA-A受体调节肾上腺髓质儿茶酚胺的释放。松冈等人证明GABA对肾上腺髓质细胞经突触诱导的兴奋性增加有抑制作用。他们认为GABA-A受体刺激会减少儿茶酚胺分泌的总量。原田等人确定GABA在调节儿茶酚胺的分泌方面具有双重作用，因为它在低水平上增强了它的释放，并在高水平上减少了它。此外，在肾上腺髓质中，GABA在肾上腺嗜铬细胞中合成，储存在嗜铬颗粒中，并在烟碱乙酰胆碱受体激活后释放,迷走神经支配肾上腺髓质。我们的结果还表明，血清去甲肾上腺素和肾上腺素水平在EG(耳EA在CO15和TEF3)和BG低于NG在15分钟后，但GABA水平的肾上腺增加TG(耳EA在CO15和TEF3)在4h后，最终治疗。因此，血清中去甲肾上腺素和肾上腺素的降低与GABA抑制剂的使用无关，与肾上腺中GABA水平无关。肾上腺GABA水平的升高可能是耳EA在CO15和TEF3的延迟效应。GABA是γ-氨基丁酸，一种重要的抑制性神经递质，参与多种代谢活动。GABA能作用于脊髓的血管运动中心，有效促进血管扩张达到降低血压的目的。研究发现，GABA还能抑制抗利尿激素的分泌，有效促进血管扩张，从而降低BP。其他专家发现GABA及其代谢物对血管紧张素转换酶的活性有很强的抑制作用。这表明GABA不仅通过抑制肾上腺髓质中儿茶酚胺的释放，而且通过其他手段产生降压作用。迷走神经支配主动脉受体。迷走神经的刺激导致周围循环系统的静脉和小动脉血管扩张，降低HR和心脏收缩的强度。因此，动脉反射中的压力感受器反应通过降低外周阻力和心输出量而导致动脉压降低.文章腧穴Hx1和Hx2由大耳神经分布，是颈神经丛的浅支，通过后支与迷走神经的耳支相通；因此，耳EA降低BP也可能部分涉及压力感受器反射。本研究结果结果表明，在最终治疗后4h，肾上腺的5-羟色胺水平高于CG。血清素抑制尼古丁引起的电流凯特-培养牛肾上腺嗜铬细胞中胆碱的释放，提示肾上腺的5-羟色胺水平可抑制乙酰胆碱诱导的肾上腺细胞兴奋性，降低儿茶酚胺释放。结果还表明，用双线预处理可以通过降低BP来改善CO15和TEF3的耳廓EA，降低SHR中的HR。这些结果与Wible等人的研究一致，他们使用了双素[1.0毫克/公斤静脉注射(IV)],和Hsu等人，使用3毫克/公斤IP;两者都报告平均BP增加。巴曼和Gebber测定双考林(1.5mg/kgIV)可完全阻断臂丛传入刺激所致的反射性迷走神经心动过缓的抑制，2.5mg/kgIV是下丘脑刺激的最大阻断。汉弗莱和McCall报道，在0.25至1.0mg/kgIV时，双线可减弱迷走神经交感抑制反应，增加交感神经放电对动脉脉搏的锁定。综上所述，双线预处理可逆转耳EA诱导的BP降低，降低HR可能是由于双线抑制迷走神经活动和交感神经放电所致。结果表明，血清去甲肾上腺素和肾上腺素水平在EG(耳EA在CO15和TEF3)低于NG（没有任何治疗）在15分钟后。儿茶酚胺从肾上腺分泌到循环是迅速的。在静息条件下，半消失时间约为2.5min，低水平的儿茶酚胺从血液中释放出来肾上腺髓质和交感神经末梢。在特定的应激条件下，血浆肾上腺素水平在大约20分钟内达到峰值40倍于对照组未受干扰的大鼠，然后水平下降到大约三分之一的峰值水平，而去甲肾上腺素水平增加了大约6倍。综上所述，这些发现表明GABA-A受体是通过耳EA降低BP的主要途径。结论本研究结果表明，在CO15和TEF3治疗7次耳电刺激后，HR降低，SHR中SBP和DBP立即降低。在较低的BP区，治疗与治疗时间之间的相互作用是显著的，这可以通过双线预处理来修正。肾上腺GABA-A水平在4h升高，血清去甲肾上腺素和肾上腺素水平在15min后在CO15和TEF3用耳针EA最终治疗后降低，提示血清去甲肾上腺素和肾上腺素的降低与肾上腺中GABA抑制剂的使用和GABA水平无关。肾上腺由DMN的迷走神经传出神经和主动脉肾神经节的交感神经节后纤维支配。在本研究中，不能证明耳EA刺激迷走神经传出可以增加肾上腺中GABA的表达，除非切断直接支配肾上腺的迷走神经后耳EA对GABA的影响消失。毫无疑问，耳电在降低BP的作用是通过迷走神经向NTS传递信号。延髓信号整合后，可通过交感传出或迷走神经传出或通过多条信号通路同时传递到心脏和肾上腺髓质。02
中西合璧述评
针刺对神经系统的调节作用，对自主神经的调节作用已有一些研究。既往认为针刺对神经调节的作用是双向的，即在血压高的时候针刺刺激是降压作用，在低血压的时候有升高血压的作用。而有些学者则认为升压作用和降压作用与穴位和针灸刺激的方向搓捻的方向有关。因此其研究结果让人琢磨不透。在本研究中，该研究团队研究发现对耳穴高频刺激时能激活交感系统，即肾上腺素类激素分泌增加，有提高血压作用；而在低频，2HZ刺激作用下，则以激活迷走神经为主，起到降压作用。在本研究中，该团队则进一步认为针刺的这种作用可能与刺激耳迷走神经有关，从而引起交感和迷走神经的兴奋作用。通过进一步的神经传导，最终作用于肾上腺，调节肾上腺激素和皮质激素的分泌发挥升高需要和降低血压的作用。本研究阐明耳针对血压的影响的机理，同时也能用中/西医结合的方式将该作用过程进行证实。有利于我们以后在临床应用中的推广和操作，有一定的临床指导意义。
翻译：刘春亮评述：彭生
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